【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：犬巴貝斯蟲（Bab）核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）

Name：Babesia Canis Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】10T/盒        

【預(yù)期用途】

巴貝斯蟲病是一種蜱傳性的血液原蟲病，該病由寄生于紅細胞內(nèi)的多種巴貝斯蟲引起，其臨床特征為發(fā)熱、精神沉郁、嗜睡、黃疸、貧血、血紅蛋白尿、嘔吐、呼吸困難等，對犬的健康造成了巨大的危害。^[1-2]

本試劑盒適用于檢測血液中的犬巴貝斯蟲，用于犬巴貝斯蟲感染的輔助診斷。

【檢驗原理】

本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術(shù)，設(shè)計一對犬巴貝斯蟲基因組特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對犬巴貝斯蟲基因組的DNA進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過5次，有效期12個月。

【適用儀器】ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測儀。

【標(biāo)本采集】無菌注射器抽取血液3~5mL至EDTA-2Na抗凝管

【保存和運輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標(biāo)本運送應(yīng)采用2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；咽拭子樣品直接取100μL于1.5mL滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用廣州維伯鑫生物科技股份有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書進行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照；樣品每滿10份，多配制1份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到PCR反應(yīng)管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟1提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完全混勻并短暫離心；

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。

【參考文獻】

[1]李蓓蓓.犬巴貝斯蟲病的診斷與預(yù)防[J].今日畜牧獸醫(yī),2019,35(03):99.

[2]陜西省部分寵物醫(yī)院犬巴貝斯蟲病流行情況及病原鑒定[D]. 唐歡.西北農(nóng)林科技大學(xué)，2019.

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：廣州維伯鑫生物科技股份有限公司 郵 編：510663

生產(chǎn)地址：廣州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學(xué)城科豐路31號G11棟201號

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